韓國科學技術院Yong-Sam Kim團隊利用超小型Cas12f1和經設計的引導RNA通過腺相關病毒傳遞實現(xiàn)高效的CRISPR編輯。相關論文于2021年9月2日在線發(fā)表于國際學術期刊《自然—生物技術》。

研究人員重新設計了Un1Cas12f1的天然引導RNA的五個部位：反式激活CRISPR RNA（tracrRNA）的5′末端、tracrRNA-crRNA互補區(qū)、一個五（尿苷酸）序列、crRNA的3′末端和tracrRNA中一個無序的莖2區(qū)。這些優(yōu)化措施協(xié)同地使平均的插入缺失頻率增加了867倍。優(yōu)化后的Un1Cas12f1系統(tǒng)在通過質粒載體、PCR擴增子和腺相關病毒（AAV）傳遞時，能夠在人類細胞中進行高效、特異的基因組編輯。由于Un1Cas12f1在原生質粒之外進行切割，它可以被用來有效地創(chuàng)建大的缺失。工程化的Un1Cas12f1系統(tǒng)顯示出與SpCas9相當?shù)男�率和與AsCas12a相似的特異性。

據(jù)了解，基因治療將受益于一個微型的CRISPR系統(tǒng)，它適合于小型AAV的基因組，并且在真核細胞中具有高切割活性和特異性。目前發(fā)現(xiàn)的最緊湊的CRISPR相關核酸酶之一是古細菌Un1Cas12f1。 然而，Un1Cas12f1及其變體在真核細胞中的活性非常低。