摘要: 11月16日，國際學(xué)術(shù)期刊病毒學(xué)雜志（Journal of virology）在線發(fā)表了中國科學(xué)院上海巴斯德學(xué)習(xí)所龍鋼課題組關(guān)于丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）新型細(xì)胞感染模型的學(xué)習(xí)成果Visualizing the essential r ...
11月16日，國際學(xué)術(shù)期刊病毒學(xué)雜志（Journal of virology）在線發(fā)表了中國科學(xué)院上海巴斯德學(xué)習(xí)所龍鋼課題組關(guān)于丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）新型細(xì)胞感染模型的學(xué)習(xí)成果Visualizing the essential role of complete virion assembly machinery in efficient hepatitis C virus cell-to-cell transmission by viral infection activated split-intein mediated reporter system (VISI)，該文被評為當(dāng)期亮點文章。 全球人口中有近2-3%的HCV感染者，同時HCV感染也是導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因之一。傳統(tǒng)治療方法為聚乙二醇干擾素與利巴韋林聯(lián)合用藥，但其治愈率不高。上市的新一代Direct antiviral agents（DAA）有較高的治愈率，但高昂的費用及可能的耐藥性產(chǎn)生仍限制其廣泛的使用，所以近期HCV的病毒學(xué)學(xué)習(xí)及疫苗的研發(fā)仍然是眾多學(xué)者關(guān)注的焦點之一。 2010年Charles M Rice等建立的細(xì)胞感染模型HDFR system（HCV-dependent fluorescence relocation）首次實現(xiàn)在不修改HCV基因組的情況下實時監(jiān)測HCV的病毒感染。該方法操作簡單，直接通過觀察熒光信號從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核即可確定被感染細(xì)胞。但該方法有較強的熒光背景（細(xì)胞質(zhì)熒光），特別在低MOI感染時很難快速找到感染細(xì)胞。 為消除上述方法的強熒光背景，方便實驗者觀察，上海巴斯德所學(xué)習(xí)助理趙凡凡和河南農(nóng)業(yè)大學(xué)聯(lián)合培養(yǎng)學(xué)習(xí)生趙婷在學(xué)習(xí)員龍鋼的指導(dǎo)下，構(gòu)建一種新型的細(xì)胞感染模型VISI system（viral infection activated split-intein mediated reporter system）。該方法首先將綠色熒光蛋白GFP在特定點分開，形成GFPn/GFPc兩段，分別定位于細(xì)胞核內(nèi)及線粒體上。一旦細(xì)胞被HCV感染，定位于線粒體上的GFPc會轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，在分離型內(nèi)含肽（split-intein）的剪接作用下，GFPn/GFPc重新拼接形成完整GFP，從而顯示熒光信號。因此細(xì)胞內(nèi)無病毒感染時無熒光，有病毒感染時出現(xiàn)核熒光，低熒光背景和高信噪比極大地方便了實驗者的試驗觀察。利用VISI system，分別構(gòu)建了VISI-GFP/VISI-mCherry兩種不同熒光顏色的細(xì)胞系(donor cell/recipient cell)，進一步學(xué)習(xí)了HCV的結(jié)構(gòu)蛋白及宿主蛋白apoE在細(xì)胞間傳播（cell to cell transmission）的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)刪除結(jié)構(gòu)蛋白（core、 E1E2）及P7基因序列嚴(yán)重影響了HCV的細(xì)胞間傳播。同時證明相比于recipient cell上的apoE缺少，donor cell上apoE缺失極大地降低了HCV 細(xì)胞間傳播的效率。 該學(xué)習(xí)構(gòu)建了一種新型高效特異的HCV感染細(xì)胞模型，不僅為HCV病毒學(xué)學(xué)習(xí)提供便利，同時為其他病毒的細(xì)胞模型建立提供新的思路。 該學(xué)習(xí)得到百人計劃、國家科技重大專項、“973”項目和國家重點研發(fā)計劃等經(jīng)費支持。 文章鏈接 VISI system構(gòu)建示意圖及病毒感染后激發(fā)核熒光信號 VISI system應(yīng)用于細(xì)胞間傳播的模式圖及HCV結(jié)構(gòu)蛋白等基因的刪除對細(xì)胞間傳播的影響 來源:上海巴斯德學(xué)習(xí)所 編輯:方法學(xué)習(xí)中取得進展上海巴斯德所建立HCV細(xì)胞感染可視化模型 | 責(zé)任編輯：蟲子
